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蛋白分析仪蛋白质分析技术

检测各种蛋白质是蛋白分析仪的主要用途,其对于很多疾病的治疗起到重要的作用。其不但对于实验室免疫检测和临床发展的需要有所符合,而且对于流程管理和质量系统的优化也合适。


氨基酸组成分析

蛋白质的肽链经过酸、碱或酶处理被拆开,就使游离氨基酸被水解成。组成蛋白质的20种氨基酸能够通过纸层析、薄层层析法等定性鉴定出来。各种氨基酸的含量能够通过离子交换层析法被精确地测定出来。目前广泛应用的方法是使用离子交换层析法原理设计制造的氨基酸自动分析仪,其能够将蛋白质的氨基酸组成精确、快速定量测定出来。


结构分析

虽然如今自动化仪器已经非常精密了,对一级结构进行分析,依然会非常耗费时间,有很大的工作量,和非常复杂的工作流程。这些年以来被广泛使用并且大大简化序列分析的方法是先对DNA的序列进行测定再将氨基酸序列推导出来。


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自身特定的氨基酸序列的多肽链为各种蛋白质所有,为一级结构,空间结构又由多肽链通过特定的卷曲折叠方式形成,就是二级、三级和四级结构。

链的N(-NH2)端通过试剂异硫氰酸苯酯被逐个降解成氨基酸的衍生物,肽链的氨基酸序列能够通过对每步反应的产物的鉴定得出来。按照这个原理设计的蛋白质序列仪,用毫克或微克的样品一次能够将40~50个序列自动测定。若想要获得完整的一级结构,还需要将蛋白质裂解成肽的碎片,经过肽的分离纯化,肽的序列测定然后使完整的序列连成。


含量分析

氨基酸为含氮的化合物,通常蛋白质会包括15%的氮,样品中的蛋白质含量能够使用克氏定氮法计算出来。肽链的量使用双缩脲法测定。在280nm波长的吸收值使用紫外分光光度计测定。简单蛋白质仅包括氨基酸,测定非常简单。糖、脂质、核酸和金属等化学物质以及辅基均包含在复合蛋白质中,鉴定还需要其他的分析方法。


纯度鉴定

蛋白质从样品中纯化,聚丙烯酰胺凝胶电泳、电聚焦电泳和末端分析等为其纯度鉴定方法。如果一条区带或恒定的末端氨基酸在两种电泳图谱都呈现,就说明已经纯化了蛋白质。


分子量测定

蛋白质的分子量通常大于10000,多肽的分子量通常小于10000。上百万也有可能是分子的量。


2019-09-29 17:03:12 浏览次数:96次
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